上海昌吉在本文介紹了可以調(diào)節(jié)染色溫度和時間的恒溫水浴箱,觀察恒溫水浴加熱法對結(jié)核桿菌抗酸染色效果的影響,因為傳統(tǒng)的抗酸染色法是結(jié)核桿菌細(xì)菌學(xué)檢查方法。經(jīng)典的妻—尼氏抗酸染色法操作過程較復(fù)雜,存在以下缺點:酒精燈加熱時間長,難以掌握染料用量,染料容易溢出玻片,沾污實驗臺或地面;加熱時染液容易干涸,須不斷補加染料;染色在開放環(huán)境進行,容易造成結(jié)核桿菌播散污染環(huán)境。現(xiàn)將結(jié)果報道如下。
1恒溫水浴加熱法抗酸染色
將固定后的模擬痰標(biāo)本玻片放入自制恒溫水浴箱的托盤內(nèi),滴加石炭酸復(fù)紅染液,蓋上托盤蓋;開啟恒溫水浴箱電源開關(guān),調(diào)節(jié)溫度旋鈕(設(shè)定50、60、70、80℃)和定時旋鈕(設(shè)定5min或10min);溫度達(dá)到設(shè)定溫度后,儀器開始自動計時,到達(dá)設(shè)定時間后儀器報警器鈴響,關(guān)閉電源開關(guān),取出玻片,加酸性酒精脫色1min,流水沖洗后美藍(lán)復(fù)染30s,干燥后用顯微鏡油鏡觀察細(xì)菌染色性和形態(tài)。
2 結(jié)果
采用恒溫水浴箱加熱法對結(jié)核桿菌進行抗酸染色,染色時間為10min,染色溫度分別為50、60、70℃和80℃,染色結(jié)果見圖1。圖1結(jié)果顯示,70℃恒溫水浴染色(圖1-C)效果良好,菌體形態(tài)清晰,色澤明亮;60℃恒溫水浴染色(圖1-B)效果一般,菌體形態(tài)可辨,色澤偏暗;50℃和80℃恒溫水浴染色(圖1-A和D)效果差,可辨別的菌體較少,色澤淡染。
圖1 不同溫度下結(jié)核桿菌抗酸染色結(jié)果
3 討論
近年來,全球結(jié)核疫情明顯回升,結(jié)核病已成為了全球關(guān)注的公共衛(wèi)生與社會問題[3],結(jié)核桿菌的細(xì)菌學(xué)檢查愈加重要。結(jié)核桿菌對酸堿有較強的抵抗力,一般染料難以進入菌體,故結(jié)核桿菌著色困難。在染色過程中進行一定程度的加熱處理,可以協(xié)助染料進入菌體。傳統(tǒng)加熱方法采用酒精燈火焰加熱,火焰溫度過高,溫度難以控制且加溫過程不穩(wěn)定,染液易在玻片上干涸。本文使用恒溫水浴箱加熱法對結(jié)核桿菌進行抗酸染色效果觀察,結(jié)果表明:恒溫水浴加熱溫度70℃、染色10min時,結(jié)核桿菌染色陽性率高,染色鮮艷,對比度好,背景清晰。恒溫水浴加熱溫度50℃、染色10min時,菌體染色效果不明顯,可能是由于結(jié)核桿菌菌體含有大量脂質(zhì),在較低溫度條件下染料無法進入菌體細(xì)胞內(nèi)。恒溫水浴加熱溫度為80℃、染色10min時,染色效果不明顯,可能是由于溫度過高造成菌體結(jié)構(gòu)被破壞。本文建立的恒溫水浴箱加熱法,一方面克服了傳統(tǒng)妻—尼氏抗酸染色法的弊端,另一方面還能同時對多份標(biāo)本涂片進行染色,明顯提高工作效率?？傊?恒溫水浴箱加熱抗酸染色法具有染色穩(wěn)定性好、安全、環(huán)保、清潔等優(yōu)點,值得推廣應(yīng)用。
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